| TAZ-TFM-2023-1471 |
Vesículas extracelulares en parénquima pulmonar: Nuevas perspectivas en la enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
Zúñiga Quílez, Sonia
Sanz-Rubio, David (dir.) ; Marín Trigo, José María (dir.)
Universidad de Zaragoza,
MED,
2023
Departamento de Medicina, Psiquiatría y Dermatología, Área de Medicina
Máster Universitario en Iniciación a la Investigación en Medicina
Resumen: INTRODUCCIÓN: La EPOC es una enfermedad crónica, progresiva, no reversible, infradiagnosticada y con alta prevalencia. Su fisiopatología es poco clara, su clínica es heterogénea y su tratamiento poco efectivo para frenar la progresión de la enfermedad. Los exosomas son vesículas extracelulares que contienen microRNAs, los cuales desempeñan un papel primordial en la comunicación intercelular. En este estudio evaluamos un conjunto de miRNAs en tejido pulmonar de pacientes con y sin EPOC, con el objetivo de conocer mejor su fisiopatología, así como de abrir la puerta a nuevas dianas terapéuticas.
METODOLOGÍA: Se obtuvo una muestra de tejido pulmonar de 2x2cm de 20 pacientes (8 EPOC y 12 no EPOC) intervenidos quirúrgicamente por un nódulo pulmonar solitario, distal a dicha lesión. No hubo diferencias significativas entre ambos grupos en cuanto a sexo y edad.
Tras digerir enzimáticamente la muestra, se obtuvieron los exosomas por precipitación con Exoquick TC (System BioScience). Los exosomas se caracterizaron utilizando ELISA frente a CD63 y microscopía electrónica de transmisión (TEM). Se seleccionaron 9 miRNAs en base a la bibliografía existente en relación con la EPOC y se analizaron mediante RT-PCR cuantitativa, comparando los resultados entre ambos grupos. Se utilizó MirTarget para predecir la diana de estos miRNAs para posteriormente aplicar el análisis de la ruta de la Enciclopedia de genes y genomas de Kyoto (KEGG).
RESULTADOS: Las imágenes TEM mostraron estructuras en forma de copa con diámetros de 70 a 140 nanómetros. El marcador proteico específico de exosomas, CD63, fue confirmado mediante el análisis ELISA. Tras analizar con RT-PCR se identificaron 4 miRNAs sobreexpresados de manera significativa en pacientes EPOC, en comparación con pacientes no EPOC (miRNA-21 p=0.02; miR-133a p=0.002, miR-133b p=0.006 y miR-143 p=0.003). El análisis mediante la KEGG de estos 4 miRNA señaló 4 vías metabólicas: la vía de señalización MAPK, la vía de señalización TGF-beta, la regulación del citoesqueleto de actina y la vía de señalización RAS.
CONCLUSIONES: Esta sobreexpresión de miRNAs en tejido pulmonar en pacientes con EPOC puede significar que estas moléculas desempeñan un papel importante en la fisiopatología y en la progresión de esta enfermedad. Todo ello abre la puerta a su uso como dianas terapéuticas en esta enfermedad, siendo necesarios nuevos estudios en esta línea de investigación.
Palabras clave: enfermedad pulmonar obstructiva crónica, RNA, exosomas, vesículas extracelulares, biomarcador, parénquima pulmonar.
METODOLOGÍA: Se obtuvo una muestra de tejido pulmonar de 2x2cm de 20 pacientes (8 EPOC y 12 no EPOC) intervenidos quirúrgicamente por un nódulo pulmonar solitario, distal a dicha lesión. No hubo diferencias significativas entre ambos grupos en cuanto a sexo y edad.
Tras digerir enzimáticamente la muestra, se obtuvieron los exosomas por precipitación con Exoquick TC (System BioScience). Los exosomas se caracterizaron utilizando ELISA frente a CD63 y microscopía electrónica de transmisión (TEM). Se seleccionaron 9 miRNAs en base a la bibliografía existente en relación con la EPOC y se analizaron mediante RT-PCR cuantitativa, comparando los resultados entre ambos grupos. Se utilizó MirTarget para predecir la diana de estos miRNAs para posteriormente aplicar el análisis de la ruta de la Enciclopedia de genes y genomas de Kyoto (KEGG).
RESULTADOS: Las imágenes TEM mostraron estructuras en forma de copa con diámetros de 70 a 140 nanómetros. El marcador proteico específico de exosomas, CD63, fue confirmado mediante el análisis ELISA. Tras analizar con RT-PCR se identificaron 4 miRNAs sobreexpresados de manera significativa en pacientes EPOC, en comparación con pacientes no EPOC (miRNA-21 p=0.02; miR-133a p=0.002, miR-133b p=0.006 y miR-143 p=0.003). El análisis mediante la KEGG de estos 4 miRNA señaló 4 vías metabólicas: la vía de señalización MAPK, la vía de señalización TGF-beta, la regulación del citoesqueleto de actina y la vía de señalización RAS.
CONCLUSIONES: Esta sobreexpresión de miRNAs en tejido pulmonar en pacientes con EPOC puede significar que estas moléculas desempeñan un papel importante en la fisiopatología y en la progresión de esta enfermedad. Todo ello abre la puerta a su uso como dianas terapéuticas en esta enfermedad, siendo necesarios nuevos estudios en esta línea de investigación.
Palabras clave: enfermedad pulmonar obstructiva crónica, RNA, exosomas, vesículas extracelulares, biomarcador, parénquima pulmonar.
Tipo de Trabajo Académico: Trabajo Fin de Master
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